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高效液相色谱法测定苦胆草胶囊中龙胆苦苷的含量

来源:我买仪器网    2017-05-10 13:05:13    关键字:   

【摘要】   目的建立苦胆草胶囊中龙胆苦苷含量测定方法。方法采用高效液相色谱法,色谱柱:迪马C18色谱柱,甲醇-水(30∶70)为流动相,检测波长270 nm 。结果龙胆苦苷在0.049 72~1.491 6μg之间线性关系良好,r=0.999 98,回收率为97. 7%,RSD 为 1.3%。结论该方法操作简单,分离效果好,灵敏度高,可作为苦胆草胶囊的质量控制标准。

【关键词】 高效液相色谱 苦胆草胶囊 龙胆苦苷

  苦胆草胶囊由苦胆草片[1,2]经剂型改变的品种,由龙胆组成,具有清热燥湿、泻肝胆火等功效[3],用于湿热黄疸、阴肿阴痒、带下、强中、湿疹瘙痒、目赤、耳聋、胁痛、口苦、惊风抽搐。龙胆中主要有效成分为龙胆苦苷 [2]。为控制产品质量,保证疗效,本文采用高效液相色谱法测定龙胆中龙胆苦苷的含量,以期为该制剂的质量控制提供参考。

  1 仪器与试药

  LC-2010C 高效液相色谱仪, LC-2010C紫外检测器,龙胆苦苷(中国药品生物制品检定所 110770-200409含量测定用),甲醇(色谱纯,天津市康科德科技有限企业),重蒸水,其它试剂为分析纯,苦胆草胶囊(沈阳康晨药业有限企业)。

  2 方法与结果

  2.1 溶液的制备

  2.1.1 对照品溶液的制备精密称取龙胆苦苷对照品12.43 mg,置50 ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀。精密量取5 ml置25 ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。

  2.1.2 供试品溶液的制备取重量差异项下的内容物适量,研细,混匀,取约0.5 g,精密称定,置50 ml量瓶中,加甲醇40 ml,超声处理40 min,放冷,加甲醇稀释至刻度,摇匀,过滤,精密量取续滤液3 ml,置10 ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,作为供试品溶液。

  2.1.3 阴性对照液的制备照处方比例制备缺龙胆的苦胆草胶囊,照“2.1.2”项下操作,制备阴性对照液。

  2.2 色谱条件色谱柱:迪马 C18 (4.6 mm×200 mm,5 μm),流动相:甲醇-水(30∶70),检测波长:270 nm ,流速:1 ml·min-1,柱温:30℃,进样量:供试品溶液、对照品溶液、阴性液各5 μl,在此色谱条件下,龙胆苦苷可与其它成分基线分离,阴性组分无干扰。结果见图1。

  2.3 线性范围的考察分别精密汲取龙胆苦苷对照品(浓度为0.049 72 mg·ml-1)1,2 μl和龙胆苦苷对照品(浓度为0.099 44 mg·ml-1)2,5,10,15 μl对照品溶液注入液相色谱仪中,按前述色谱条件在270 nm波长处测定,以进样量为横坐标,以色谱峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,经回归处理,方程为:Y=1 937 112X-3 060(r=0.999 98), 可见,龙胆苦苷进样量在0.049 72~1.491 6 μg范围内,线性关系良好。

  2.4 精密度实验照样品项下实验方法进行提取,精密汲取同一供试品溶液(批号050601),连续进样6次,测定色谱峰面积,RSD为0.7%,表明精密度良好。

  2.5 稳定性实验考察照样品项下实验方法进行提取,精密汲取同一供试品溶液(批号050601)5 μl ,分别于配制后0,4,6,8,12 h测定峰面积,RSD为0.8%,结果显示,供试品溶液制备后12 h内基本稳定。

  a-样品色谱图 b- 阴性样品色谱图 c-龙胆苦苷对照品色谱图 1.龙胆苦苷

  图1 苦胆草胶囊中龙胆苦苷含量测定色谱图(略)

  2.6 重复性实验照样品项下实验方法进行提取,精密称取供试品(批号050601)6份样品,各0.5 g,分别按样品测定项下方法操作,结果RSD为1.1%。表明本品测定方法重复性良好。

  2.7 加样回收率实验采用加样回收实验方法,取供试品(批号050601)含龙胆苦苷为22.541 6 mg·g-1的样品约0.12 g,置25 ml容量瓶中,分别精密加入龙胆苦苷对照品溶液(C=0.636 6 mg·ml-1)5 ml,加入甲醇15 ml,按样品含量测定方法操作。测定结果见表1。

  表1 龙胆苦苷含量测定回收率实验(略)

  2.8 样品含量测定分别精密汲取对照品溶液与供试品溶液各5 μl,注入液相色谱仪,测定。结果见表2 。

  表2 不同批号中龙胆苦苷含量测定结果(略)

  3 讨论

  本实验比较了超声20,30,40 min不同时间龙胆苦苷的提取率,结果40 min提取的得率与50 min的相同,因此确定提取时间为40 min。

  将对照品龙胆苦苷适量溶于甲醇中,进行光谱扫描,在波长270 nm处有最大吸取,故选定270 nm为龙胆苦苷的检测波长。

  龙胆苦苷的含量测定方法已有文献报道[4~6]。本文建立的方法具有样品处理简单的特点,本品含量测定理论板数按龙胆苦苷苷峰计算应不低于3 000时,样品分离良好。

  采用本方法测定龙胆中龙胆苦苷的含量,样品分离良好且准确、简便、迅速。


 

 

 

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